NEWS

ROVALAB GmbH is now certified.

select language

PCR MASTER MIX

BESTELL-INFORMATION


Best.-Nr.

Anzahl der 50 µl Reaktionen

Volumen

Preis (EUR)

2x PCR Master Mix

# R 500
100 2 x 1.25 ml 39,00
# R 501
500
10 x 1.25 ml 167,00
2x Red PCR Master Mix
# R 540
100
2 x 1.25 ml 48,75
# R 541
500
10 x 1.25 ml 195,00
2x Hot Start PCR Master Mix
# R 530 100
2 x 1.25 ml 56,0
# R 531 500
10 x 1.25 ml 234,00
2x Red Hot Start PCR Master Mix
# R 520 100
2 x 1.25 ml 67,00
# R 521 500
10 x 1.25 ml 280,00


BESCHREIBUNG

Der 2x PCR Master Mix beinhaltet alle benötigten Reagenzien für eine PCR, so dass die PCR leicht und einfach durchzuführen ist. Die Konzentrationen aller Bestandteile (einschließlich der Taq Polymerase bzw. der Hot Start Taq Polymerase) sind optimal für eine erfolgreiche PCR aufeinander abgestimmt. Mit dem 2x PCR Master Mix müssen Sie nur noch die entsprechenden Primer und die Template DNA zufügen, wodurch der Pipettieraufwand und auch der Eintrag möglicher Fehlerquellen minimiert wird. Der Mix ist konzipiert für die Amplifikation von DNA-Fragmenten bis zu 4 kb, aber auch längere Targets können in den meisten Fällen erfolgreich amplifiziert werden.

Der Red PCR Master Mix und der Red Hot Start PCR Master Mix enthalten einen inerten roten Marker-Farbstoff, so dass eine Identifikation der Reaktionen, zu denen das Enzym zugegeben wurde, möglich ist. Der Farbstoff hat keine nachteiligen Auswirkungen auf die PCR.


QUALITÄTSKONTROLLE

FUNKTIONELLE TESTS

SPEZIFIKATION

4 kb PCR

Amplifikation erfolgreich

PHYSIKALISCHE TESTS

SPEZIFIKATION

Endonuklease Assay

Keine Aktivität nachweisbar

DNase Assay

Keine Aktivität nachweisbar

RNase Assay

Keine Aktivität nachweisbar


BASIS PROTOKOLL

Pipettieren Sie die folgenden Komponenten in ein PCR-Reaktionsgefäß und geben Sie die entsprechende Menge Wasser hinzu, um ein Endvolumen von 50 µl zu erreichen:

Komponente

Volumen (in µL)

Finale Konzentration

2 x PCR-Master Mix

25

1x (1.5 mM MgCl2)

Vorwärts-Primer

variabel

0.2 – 1 µM

Rückwärts-Primer

variabel

0.2 – 1 µM

Template-DNA

variabel

1 – 150 ng

Destilliertes, steriles Wasser

Zugabe auf Endvolumen von 50


Endvolumen

50


Mischen Sie alle Komponenten vor der Verwendung vorsichtig, um Konzentrationsgradienten im Röhrchen zu vermeiden und setzen Sie den Mix auf Eis in geeigneten PCR-Röhrchen an. Kein Vortexen oder Zentrifugieren. Die optimalen Konzentrationen der Primer, der Templates sowie das Temperaturprofil im Cycler müssen für jede Reaktion individuell angepasst werden.

Um optimale Ergebnisse zu erhalten pipettieren Sie zuerst die Primer, dann die Template-DNA und zuletzt den Master Mix.


TROUBLESHOOTING

Beobachtung

Check



Unspezifische Produkte (smearing)

  • Konzentration der Enzyme, Primer und/oder dNTP’s zu hoch
  • Annealing-Temperatur für die Primer zu niedrig
  • Zu viele PCR Zyklen
  • Annealing- und Extensionszeit zu lang
  • Konzentration der Template-DNA zu hoch



Geringe Produktausbeute

  • Zu hohe oder zu geringe Enzymkonzentration
  • Denaturierungs- /Extensions-Temperatur zu hoch
  • Falsche Annealing-Temperatur
  • Zu wenige PCR Zyklen
  • Minderwertig konstruierte Primer
  • Inhibitoren aus der DNA-Aufreinigung (z.B. SDS)



Kein Produkt

  • Falsche Annealing-Temperatur
  • Unvollständige Denaturierung
  • Minderwertig konstruierte Primer
  • Verwendung von schadhaften Ausgangskomponenten, z.B. durch falsche Lagerung

LAGERUNG

Lagerung bei -20°C für 12 Monate. Minimieren Sie Einfrier- und Auftauzyklen durch das Aliquotieren des Master Mixes.

WARNUNG

Nur für Forschungszwecke. Nicht geeignet für die Diagnostik von Krankheiten bei Menschen oder Tieren. Keine interne oder externe Anwendung am Mensch oder Tier.